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发布者:上海同金化工有限公司2022-5-7

单个tkgst突变体di、lf、fi和li 在大肠 bl菌株中表达并进行纯化。将tkgst突变体与型tkgst对(s)--酮-的活性进行了比较chart 。(s)-,,-trihydroxybutan--one (l-erythrulose,) 是型tk的非磷酸化底物之一,被选为对照。型和突变体对表现出的活性,除了di,它是被脂肪链取代的极性残基。非极性残基ile代替asp显着降低酶的活性,可能是由于缺乏与的c的-的相互作用。脂肪链对其他非极性残基的突变对活性没有影响。




先前用α--酮-测试的单位点突变体没有裂解 (±) -或 --酮和的c-c 键。转向三重tkgst突变体-hlhxdx 或 lx,或 fx,或 lx 或 lx,将先前确定的位置结合起来进行逆向反应使用脂肪族酮酸作为供体和脂肪醛作为受体形成α--酮。在大肠bl菌株中表达-,使用粗提物针对α--酮和进行筛选,并与型tkgst进行比较。根据产物或的斑点强度,通过薄层色谱法(tlc)估计每个-中的阳性百分比。




手性邻位-醇在生物活性分子中广泛存在,也是一类重要的结构砌块,例如抗病--(ethambutol)、抗埃替格韦(elvitegravir)等分子中都含有此类结构砌块。化学法合成手性的邻位-醇存在反应条件苛刻、选择性不-问题。胺脱氢酶可以利用氨分子作为-供体催化-直接还原胺化生成相应的手性胺,被认为是一种有前景的手性胺绿色合成途径,但还未见将其用于催化α--酮的不对称还原胺化制备手性-醇的研究-。



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