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单个tkgst突变体di、lf、fi和li 在大肠 bl菌株中表达并进行纯化。将tkgst突变体与型tkgst对(s)--酮-的活性进行了比较chart 。(s)-,,-trihydroxybutan--one (l-erythrulose,) 是型tk的非磷酸化底物之一,被选为对照。型和突变体对表现出的活性,除了di,它是被脂肪链取代的极性残基。非极性残基ile代替asp显着降低酶的活性,可能是由于缺乏与的c的-的相互作用。脂肪链对其他非极性残基的突变对活性没有影响。
先前用α--酮-测试的单位点突变体没有裂解 (±) -或 --酮和的c-c 键。转向三重tkgst突变体-hlhxdx 或 lx,或 fx,或 lx 或 lx,将先前确定的位置结合起来进行逆向反应使用脂肪族酮酸作为供体和脂肪醛作为受体形成α--酮。在大肠bl菌株中表达-,使用粗提物针对α--酮和进行筛选,并与型tkgst进行比较。根据产物或的斑点强度,通过薄层色谱法(tlc)估计每个-中的阳性百分比。