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先前研究表明,用作供体底物的酮糖可以被酮酸-酸(hpa) 取代,通过释放-使反应不可逆。因此,tk似乎是一种-的酶,用于不对称合成α--酮方案。当hpa作为供体时,tk对非磷酸化短碳链α--醛(c–c)表现出活性。此外,tk优先接受(r)--醛,产生 (s, r)α--酮。发现并表征了来自嗜热脂肪地芽孢 (tkgst)的个热稳定tk,在高温下表现出高稳定性和对异常反应条件的-性。使用合理的诱变方法将-化或非-化醛作为受体 (,) 和脂肪族 α-酮酸作为供体,提高和扩大了 tkgst 底物特-及其对映体偏好,确认了工程化的tkgst,其能够促进了脂肪族受体和供体底物组合的脂肪族α--酮 (c-c) 的合成。
先前的结果表明,双变体hlhs是提高对酸类似物包括氧代-的底物亲和力的突变体。较小且极性较小的侧链代替两个组氨酸的存在允许扩大较大疏水供体底物的活性位点并保持催化机制完整。将这两个位置与asp、leu、phe或 leu上的突变连续组合。此外选择l位,它参与稳定 thdp 的唑循环,并且还可以通过与比 leu 更长的碳链残基相互作用来稳定脂肪族底物。创建了五个-,hlhxdx或 lx、或 fx 或 lx 或 lx表 。